基于 SPRI(Solid Phase Reversible Immobilization ) 技術(shù),在磁珠法反應(yīng)體系中,核酸分子(DNA & RNA)會由線性壓縮成球狀, DNA 在一定濃度的 PEG 存在條件下,NaCl 或 MgCl2 促進(jìn)條件下,DNA 分子構(gòu)象會發(fā)生急劇變化,會暴露出磷酸骨架上大量的帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán),與表面帶負(fù)電荷的羧基-COOH 磁珠結(jié)合。目前認(rèn)為這種負(fù)負(fù)電荷間的作用是由于帶正電荷的鹽離子的作用(如 Na+)。帶負(fù)電磷酸基團(tuán)借由解離的鹽離子(如 Na+)與羧基形成「陰離子-陽離子-陰離子」的鹽橋結(jié)構(gòu),使 DNA 被特異性吸附到羧基磁珠表面。而當(dāng)反應(yīng)緩沖液被棄除后,加入水性分子,會快速充分水化核酸分子,解除三者之間的離子相互作用,使吸附到磁珠上的核酸分子被純化出來。利用磁珠的磁性,可通過外加磁場進(jìn)行收集。
受益于高通量測序技術(shù)的發(fā)展,磁珠也憑借其高通量,適用于自動化的特點備受推崇,廣泛用于 NGS 文庫構(gòu)建中的 DNA 提取純化及雙輪分選(片篩)。
DNA 提取純化的目的在于去除不想要的片段、回收需要的片段。由于磁珠優(yōu)先吸附大片段,因而可通過一定比例的磁珠吸附特定大小以上的片段,丟棄上清(去除非目標(biāo)片段)后將磁珠吸附的 DNA 洗脫回收。
DNA 雙輪分選(片篩)目的在于從片段中選擇特定區(qū)域的 DNA 片段大小。由于磁珠優(yōu)先吸附大片段,因而需通過兩輪磁珠操作進(jìn)行分選。
兔牙生物科技研發(fā)的 BunnyMagTM 磁珠分選純化試劑盒中的磁珠,與市面上大部分的磁珠類似,
磁珠結(jié)構(gòu)(分為 3 層):
? 內(nèi)層的核心是 Polystyrene,PS
? 第二層包裹磁性物質(zhì)——四氧化三鐵(Fe3O4)
? 外層表面是羧基(-COOH)修飾的高分子材料
磁珠體系主要包括磁珠、聚乙二醇(PEG)、鹽離子(NaCl)
兔牙科技 BunnyMagTM 磁珠的優(yōu)勢:
?。?)樣本需求量低:微量的材料即可提到高濃度的核酸;
?。?)操作簡單快速:整個操作流程基本分為五步(裂解、結(jié)合、洗滌、干燥、洗脫),全程無需離心操作,大多可在 30~60 分鐘內(nèi)完成;
?。?)質(zhì)量穩(wěn)定可靠:游離的磁珠與核酸的結(jié)合量更大,特異性的結(jié)合使得核酸純度更高,且可通過控制磁珠表面基團(tuán)來調(diào)節(jié)核酸回收量;
?。?)全自動化操作:采用核酸提取儀可實現(xiàn)自動化、高通量操作,可實現(xiàn)幾十甚至幾百個樣品的提?。?/p>
?。?)安全無毒無害:試劑不含酚等有毒化學(xué)試劑,完全符合現(xiàn)代化環(huán)保理念。





