按照BSL-3標(biāo)準(zhǔn)建造的實(shí)驗(yàn)室，也稱為生物安全實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室需與建筑物中的一般區(qū)域隔離。其具體標(biāo)準(zhǔn)微生物操作、特殊操作、安全設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室設(shè)施要求如下。
3.1標(biāo)準(zhǔn)操作
完成傳染性材料操作后，對(duì)手套進(jìn)行消毒沖洗，離開實(shí)驗(yàn)室之前，脫掉手套并洗手。設(shè)施內(nèi)禁止吃、喝、抽煙，不準(zhǔn)觸摸隱形眼鏡和使用化妝品。戴隱形眼鏡的人也要佩戴防護(hù)鏡或面罩。食物只能存放在工作區(qū)以外的地方。禁止用嘴吸取試驗(yàn)液體，要使用專用的移液管。一切操作均要小心，以減少和避免產(chǎn)生氣溶膠。實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生至少每天清潔一次，工作后隨時(shí)消毒工作臺(tái)面，傳染性材料外溢、濺出污染時(shí)要立即消毒處理。所有培養(yǎng)物、儲(chǔ)存物和其它日常廢棄物在處理之前都要用高壓滅菌器進(jìn)行有效地滅菌處理。需要在實(shí)驗(yàn)室外面處理的材料，要裝入牢固不漏的容器內(nèi)，加蓋密封后傳出實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室的廢棄物在送到處理地點(diǎn)之前應(yīng)消毒、包裝，避免污染環(huán)境。對(duì)BSL-3內(nèi)操作的菌、毒種必須由兩人保管，保存在安全可靠的設(shè)施內(nèi)，使用前應(yīng)辦理批準(zhǔn)手續(xù)，說明使用劑量，并詳細(xì)登記，兩人同時(shí)到場(chǎng)方能取出。試驗(yàn)要有詳細(xì)使用和銷毀記錄。昆蟲和嚙齒類動(dòng)物控制應(yīng)參照其它有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。
3.2特殊操作
制定安全細(xì)則
實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人要根據(jù)實(shí)際情況制定本實(shí)驗(yàn)室特殊而全面的生物安全規(guī)則和具體的操作規(guī)程，以補(bǔ)充和細(xì)化本規(guī)范的操作要求，并報(bào)請(qǐng)生物安全委員會(huì)批準(zhǔn)。工作人員必須了解細(xì)則，認(rèn)真貫徹執(zhí)行。
生物危害標(biāo)志
要在實(shí)驗(yàn)室入口的門上標(biāo)記國(guó)際通用生物危害標(biāo)志。實(shí)驗(yàn)室門口標(biāo)記實(shí)驗(yàn)微生物種類、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人的名單和電話號(hào)碼，指明進(jìn)入本實(shí)驗(yàn)室的特殊要求，諸如需要免疫接種、佩戴防護(hù)面具或其它個(gè)人防護(hù)器具等。實(shí)驗(yàn)室使用期間，謝絕無關(guān)人員參觀。如參觀必須經(jīng)過批準(zhǔn)并在個(gè)體條件和防護(hù)達(dá)到要求時(shí)方能進(jìn)入。
生物危害警告
實(shí)驗(yàn)過程中實(shí)驗(yàn)室或物理防護(hù)設(shè)備里放有傳染性材料或感染動(dòng)物時(shí)，實(shí)驗(yàn)室的門必須保持緊閉，無關(guān)人員一律不得進(jìn)入。門口要示以危害警告標(biāo)志，如掛紅牌或文字說明實(shí)驗(yàn)的狀態(tài)，禁止進(jìn)入或靠近。
進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的條件
實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人要指定、控制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)人員和輔助人員。未成年人不允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。受感染概率增加或感染后果嚴(yán)重的實(shí)驗(yàn)室工作人員不允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。只有了解實(shí)驗(yàn)室潛在的生物危害和特殊要求并能遵守有關(guān)規(guī)定合乎條件的人才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。與工作無關(guān)的動(dòng)植物和其它物品不允許帶入實(shí)驗(yàn)室。
工作人員的培訓(xùn)
對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員和輔助人員要進(jìn)行與工作有關(guān)的定期和不定期的生物安全防護(hù)專業(yè)培訓(xùn)。實(shí)驗(yàn)人員需經(jīng)專門生物專業(yè)訓(xùn)練和生物安全訓(xùn)練，并由有經(jīng)驗(yàn)的專家指導(dǎo)，或在生物安全委員會(huì)指導(dǎo)監(jiān)督下工作。必須學(xué)會(huì)氣溶膠暴露危害的評(píng)價(jià)和預(yù)防方法。在BSL-3實(shí)驗(yàn)室做傳染性工作之前，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人要保證和證明，所有工作人員熟練掌握了微生物標(biāo)準(zhǔn)操作和特殊操作，熟練掌握本實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、設(shè)施的特殊操作運(yùn)轉(zhuǎn)技術(shù)。包括操作致病因子和細(xì)胞培養(yǎng)的技能，或?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人特殊培訓(xùn)的內(nèi)容，或包括在安全微生物工作方面具有豐富經(jīng)驗(yàn)的專家和安全委員會(huì)指導(dǎo)下規(guī)定的內(nèi)容。避免氣溶膠暴露：一切傳染性材料的操作不可直接暴露于空氣之中，不能在開放的臺(tái)面上和開放的容器內(nèi)進(jìn)行，都應(yīng)在生物安全柜內(nèi)或其它物理防護(hù)設(shè)備內(nèi)進(jìn)行。需要保護(hù)人體和樣品的操作可在室內(nèi)排放式2A型生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。只保護(hù)人體不保護(hù)樣品的操作可在Ⅰ級(jí)生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。如果操作帶有放射性或化學(xué)性有害物時(shí)應(yīng)在2B2型生物安全柜。禁止使用超凈工作臺(tái)。
避免利器的感染
對(duì)可能污染的利器，包括針頭、注射器、刀片、玻璃片、吸管、毛細(xì)吸管和解剖刀等，必須經(jīng)常地采取高度有效的防范措施，必須預(yù)防經(jīng)皮膚的實(shí)驗(yàn)室感染。在BSL-3實(shí)驗(yàn)室工作，盡量不使用針頭、注射器和其它銳利的器件。只有在必要時(shí)，如實(shí)質(zhì)器官的注射、靜脈切開、或從動(dòng)物體內(nèi)和瓶子(密封膠蓋)里吸取液體時(shí)才能使用,盡量用塑料制品代替玻璃制品。在注射和抽取傳染性材料時(shí)，使用一次性注射器(針頭與注射器一體的)。使用過的針頭在消毒之前避免不必要的操作，如不可折彎、折斷、破損，不要用手直接蓋上原來的針頭帽;要小心地把其放在固定方便且不會(huì)刺破的處理利器的容器里，然后進(jìn)行高壓消毒滅菌。破損的玻璃不能用手直接操作，必須用機(jī)械的方法清除，如刷子、夾子和鑷子等。
污染的清除和消毒
傳染性材料操作完成之后，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺(tái)面應(yīng)用有效的消毒劑進(jìn)行常規(guī)消毒，特別是傳染材料溢出、濺出其它污染，更要及時(shí)消毒。濺出的傳染性材料的消毒由適合的專業(yè)人員處理和清除，或由其它經(jīng)過訓(xùn)練和有使用高濃度傳染物工作經(jīng)驗(yàn)的人處理。一切廢棄物處理之前都要高壓滅菌，一切潛在的實(shí)驗(yàn)室污物(如，手套、工作服等)均需在處理或丟棄之前消毒。需要修理、維護(hù)的儀器，在包裝運(yùn)輸之前要進(jìn)行消毒。
感染性樣品的儲(chǔ)藏運(yùn)輸
一切感染性樣品如培養(yǎng)物、組織材料和體液樣品等在儲(chǔ)藏、搬動(dòng)、運(yùn)輸過程中都要放在不泄漏的容器內(nèi),容器外表面要徹底消毒，包裝要有明顯、牢固的標(biāo)記。
病原體痕跡的監(jiān)測(cè)
采集所有實(shí)驗(yàn)室工作人員和其他有關(guān)人員的本底血清樣品，進(jìn)行病原體痕跡跟蹤檢測(cè)。依據(jù)被操作病原體和設(shè)施功能情況或?qū)嶋H中發(fā)生的事件，定期、不定期采集血清樣本，進(jìn)行特異性檢測(cè)。
醫(yī)療監(jiān)督與保健
在BSL-3實(shí)驗(yàn)室工作期間對(duì)工作者進(jìn)行醫(yī)療監(jiān)督和保健，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室操作的病原體，工作人員要接受相應(yīng)的試驗(yàn)或免疫接種(如狂犬病疫苗，TB皮膚試驗(yàn))。
暴露事故的處理
當(dāng)生物安全柜或?qū)嶒?yàn)室出現(xiàn)持續(xù)正壓時(shí)，室內(nèi)人員應(yīng)立即停止操作并戴上防護(hù)面具，采取措施恢復(fù)負(fù)壓。如不能及時(shí)恢復(fù)和保持負(fù)壓，應(yīng)停止實(shí)驗(yàn)，及早按規(guī)程退出。發(fā)生此類事故或具有傳染性暴露潛在危險(xiǎn)的其它事故和污染，當(dāng)事者除了采取緊急措施外，應(yīng)立即向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人報(bào)告，聽候指示，同時(shí)報(bào)告國(guó)家獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全管理委員會(huì)。負(fù)責(zé)人和當(dāng)事人應(yīng)對(duì)其事故進(jìn)行緊急科學(xué)、合理的處理。事后，當(dāng)事人和負(fù)責(zé)人應(yīng)提供切合實(shí)際的醫(yī)學(xué)危害評(píng)價(jià)，進(jìn)行醫(yī)療監(jiān)督和預(yù)防治療。實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人對(duì)事件的過程要予以調(diào)查和公布，寫出書面報(bào)告呈報(bào)國(guó)家獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全管理委員會(huì)同時(shí)抄報(bào)實(shí)驗(yàn)室安全委員會(huì)并保留備份。
3.3安全設(shè)備(初級(jí)防護(hù)屏障)
防護(hù)服裝
實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，工作人員要穿防護(hù)性實(shí)驗(yàn)服，如長(zhǎng)服裝、短套裝，或有護(hù)胸的工作服裝。消毒后清洗，如有明顯的污染應(yīng)及時(shí)換掉，作為污棄物處理。在實(shí)驗(yàn)室外面不能穿工作服。
防護(hù)手套
在操作傳染性材料、感染動(dòng)物和污染的儀器時(shí)必須戴手套，戴雙層為好，必要時(shí)再戴上不易損壞的防護(hù)手套。更換手套前，戴在手上消毒沖洗，一次性手套不得重復(fù)使用。
生物安全柜
感染性材料的操作，如感染動(dòng)物的解剖，組織培養(yǎng)、雞胚接種、動(dòng)物體液的收取等，都應(yīng)在Ⅱ級(jí)以上生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。離心、粉碎、攪拌等不能在Ⅱ級(jí)生物安全柜內(nèi)進(jìn)行的工作可在較大或特制的Ⅰ級(jí)生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。
其它物理防護(hù)
當(dāng)操作不能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行時(shí)，個(gè)人防護(hù)(Ⅲ級(jí)以上類似防護(hù)設(shè)備的具體要求)和其它物理防護(hù)設(shè)備(離心機(jī)安全帽，或密封離心機(jī)轉(zhuǎn)頭)并用。
面部保護(hù)
污染區(qū)、半污染區(qū)應(yīng)備有防護(hù)面具以便緊急使用，當(dāng)房間內(nèi)有感染動(dòng)物時(shí)要戴面具保護(hù)。建立緊急防護(hù)工作點(diǎn)。
緊急防護(hù)用品
污染區(qū)或半污染區(qū)備用防護(hù)面具、沖洗眼睛的器具和藥品等，隨時(shí)可用。
3.4實(shí)驗(yàn)室設(shè)施(次級(jí)防護(hù)屏障)
BSL-3生物安全實(shí)驗(yàn)室里所原微生物的操作均在Ⅱ級(jí)以上(含Ⅱ級(jí))生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，其次級(jí)屏障標(biāo)準(zhǔn)如下：
建筑結(jié)構(gòu)和平面布局
建筑物抗震能力七級(jí)以上，防鼠、防蟲、防盜。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)凈高應(yīng)在2.6米以上，管道層凈高宜不低于2.0米。建筑物內(nèi)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與活動(dòng)不受限制的公共區(qū)域隔開，設(shè)置安全門并安裝門鎖，禁止無關(guān)人員進(jìn)入。進(jìn)入設(shè)施的通道設(shè)帶閉門器的雙扇門,其后是更衣室，分成一更室(清潔區(qū))和二更室(半污染區(qū))，二更室后面為后室或稱緩沖室(半污染區(qū))，進(jìn)出緩沖室的門應(yīng)為自動(dòng)互鎖。如果是多個(gè)實(shí)驗(yàn)室共用一個(gè)公用的走廊(或緩沖室)，則進(jìn)入每個(gè)實(shí)驗(yàn)室宜經(jīng)過一個(gè)連鎖的氣閘(鎖)門。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有安全通道和緊急出口，并有明顯標(biāo)識(shí)。半污染區(qū)與清潔區(qū)之間必須設(shè)置傳遞窗。洗刷室、機(jī)房等附屬區(qū)域應(yīng)是清潔區(qū)，但應(yīng)盡量縮短與實(shí)驗(yàn)室的距離，方便工作。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)可設(shè)密閉觀察窗。
密閉性和內(nèi)表面
一切設(shè)施、設(shè)備外表無毛刺、無銳利棱角，盡量減少水平表面面積，便于清潔和消毒。各種管道通過的孔洞必須密封。墻和頂棚的表面要光滑，不刺眼、不積塵、不受化學(xué)物和常用消毒劑的腐蝕，無滲水、不凝集蒸氣。地表面應(yīng)該是一體、防滑、耐磨、耐腐、不反光、不積塵、不漏水，如能按污染區(qū)劃分給予顏色區(qū)別更好。工作臺(tái)面不能滲水，耐中等熱、有機(jī)溶劑、酸、堿和常用消毒劑的損害和腐蝕。實(shí)驗(yàn)室必要的桌椅櫥柜等用具事先設(shè)計(jì)，便于穩(wěn)妥安放和使用，彼此留有一定空間便于清潔衛(wèi)生，表面消毒方便、耐腐。
消毒滅菌設(shè)施
必須安裝雙扉式高壓蒸汽滅菌器，安裝在半污染區(qū)與洗刷室之間。滅菌器的兩個(gè)門應(yīng)互為連鎖，滅菌器應(yīng)滿足生物安全二次滅菌要求。污染區(qū)、半污染區(qū)的房間或傳遞窗內(nèi)可安裝紫外燈。室內(nèi)應(yīng)配制人工或自動(dòng)消毒器具(如消毒噴霧器、臭氧消毒器)并備有足夠的消毒劑。一切實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的廢棄物都要分類集中裝在可靠的容器內(nèi)，都要在設(shè)施內(nèi)進(jìn)行消毒處理(高壓、化學(xué)、焚化、其它處理)，儀器的消毒選擇適當(dāng)?shù)姆椒ǎ鐐鬟f式臭氧消毒柜、環(huán)氧乙烷消毒袋等，如果廢棄物需要傳至實(shí)驗(yàn)室外，應(yīng)該消毒后并裝入密封容器、包裝。
凈化空調(diào)
實(shí)驗(yàn)室污染區(qū)和半污染區(qū)采用負(fù)壓?jiǎn)蜗蛄魅嘛L(fēng)凈化空調(diào)系統(tǒng)。污染區(qū)和半污染區(qū)不允許安裝暖氣、分體空調(diào)，不可用電風(fēng)扇。溫度230C±20C、相對(duì)濕度40%—70%。室內(nèi)噪聲不超過60分貝。氣流方向始終保證由清潔區(qū)流向污染區(qū)，由低污染區(qū)流向高污染區(qū)?？照{(diào)系統(tǒng)應(yīng)安裝壓力無關(guān)裝置，以保證系統(tǒng)壓力平衡，排風(fēng)應(yīng)采用一用一備自動(dòng)切換系統(tǒng)。發(fā)生緊急情況時(shí)，應(yīng)關(guān)閉送風(fēng)系統(tǒng)，維持排風(fēng)，保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)安全負(fù)壓。供氣需經(jīng)HEPA過濾。排出的氣體必須經(jīng)過至少兩級(jí)HEPA過濾排放，不允許在任何區(qū)域循環(huán)使用。
室內(nèi)潔凈度高于萬級(jí)。實(shí)驗(yàn)室送風(fēng)口應(yīng)在一側(cè)的棚頂，出風(fēng)口應(yīng)在對(duì)面墻體的下部，盡量減少室內(nèi)氣流死角。保持單向氣流，矢流方式較為合適。實(shí)驗(yàn)室門口安裝可視裝置，能夠確切表明進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的氣流方向。Ⅱ級(jí)生物安全柜每年檢測(cè)一次。2A型的排氣可進(jìn)入室內(nèi)，2B2型安全柜和Ⅲ級(jí)安全柜的排風(fēng)要通過實(shí)驗(yàn)室總排風(fēng)系統(tǒng)排出。如果Ⅲ級(jí)安全柜是帶有二次HEPA過濾、移動(dòng)式，氣流亦可在室內(nèi)排氣，但排氣口應(yīng)靠近室內(nèi)排風(fēng)口。如有其它設(shè)備如液體消毒傳遞窗、藥物熏蒸消毒器等的抽氣系統(tǒng)，必須經(jīng)過HEPA過濾，并根據(jù)需要更換。
水的凈化處理每個(gè)房間出口附近設(shè)置一個(gè)非手動(dòng)開關(guān)的洗手池。污染區(qū)、半污染區(qū)和有可能被污染的供水管道應(yīng)采取防止回流措施。如有下水，水池或地漏要設(shè)置消毒設(shè)施。下水下方必須設(shè)有水封，并始終充+盈消毒劑，水封的排氣應(yīng)加HEPA過濾裝置。可能污染的下水只能排放到消毒裝置內(nèi)，消毒后再排至公共下水道。如沒有下水排放，或不外排的所有廢水均須收集并高壓處理。潔凈區(qū)域的下水可直接排入公共下水道。
污染物和廢棄物處理
對(duì)可能污染的物品和其它廢棄物要放在專用的防止污染擴(kuò)散或可消毒的容器里，以便消毒或高壓滅菌處理。
實(shí)驗(yàn)室監(jiān)控系統(tǒng)
應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室各種狀態(tài)及設(shè)施全面設(shè)置監(jiān)控報(bào)警點(diǎn)，構(gòu)成完善的實(shí)驗(yàn)室安全報(bào)警系統(tǒng)。備用電源非雙路供電情況下，應(yīng)配有備用電源，在停電時(shí)，至少能夠保證空調(diào)系統(tǒng)、警鈴、燈光、進(jìn)出控制和生物安全設(shè)備的工作。
照明
照明應(yīng)適合室內(nèi)的一切活動(dòng)，不反射、不刺眼，不影響視線。照明燈最好把燈具的部件裝在頂棚里，或采取減少積塵措施。
通訊
實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外應(yīng)有適合的通訊聯(lián)系設(shè)施(電話、傳真、計(jì)算機(jī)等)，進(jìn)行無紙化操作。驗(yàn)收和年檢BSL-3設(shè)施和運(yùn)行必須是指令性的。實(shí)驗(yàn)室的驗(yàn)收或年檢應(yīng)參考ISO10648標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法進(jìn)行密封性測(cè)試，其檢測(cè)壓力不低于250Pa，半小時(shí)的小時(shí)泄漏率不超過10%，以保證維護(hù)結(jié)構(gòu)的可靠性。新建設(shè)施的功能必須檢測(cè)驗(yàn)收，確認(rèn)設(shè)計(jì)和運(yùn)作參數(shù)合乎要求方能使用。運(yùn)行后每年再進(jìn)行一次檢測(cè)確認(rèn)。
