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Lambda25/35/45紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)

　　主要特點(diǎn)

　　1、儀器原理：雙光束、雙單色器、比例記錄并由計(jì)算機(jī)控制的紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)。

　　2、波長(zhǎng)范圍寬：190～1100nm

　　3、Lambda25為1nm固定狹縫， Lambda35和45的狹縫為可調(diào)型，用戶(hù)可在0.5,1,2,4nm的四種狹縫中任選; Lambda45中包括一個(gè)前置單色器，從而使儀器的雜散光指標(biāo)更低，全波長(zhǎng)范圍內(nèi)吸光度的線(xiàn)性范圍大大提高。

　　4、最穩(wěn)定、長(zhǎng)壽命、寬范圍的固體檢測(cè)器(SCD，PMT只能到900nm)

　　5、Lambda25、35、45系列紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)為基于結(jié)果的高質(zhì)量的光學(xué)系統(tǒng)，儀器信號(hào)的穩(wěn)定性極高：對(duì)于時(shí)間驅(qū)動(dòng)的試驗(yàn)或大量樣品的連續(xù)測(cè)定非常重要;

　　6、全息光柵的雜散光極低，確保了真實(shí)的吸光度有寬的線(xiàn)性范圍。

　　7、儀器的噪音極低，可準(zhǔn)確地測(cè)出極低的吸光度;

　　8、多種附件的擴(kuò)充功能：

　　溫度控制(單池或多池的水浴或半導(dǎo)體控溫的池架)

　　不同長(zhǎng)短光程比色杯及架

　　固體的透射分析

　　相對(duì)鏡反射附件：6度固定角(用于反射和厚度測(cè)量)，15～70度變角;

　　漫反射附件：50mm積分球(Lambda 35專(zhuān)用)

　　AS93 plus自動(dòng)進(jìn)樣器

　　流動(dòng)注射分析系統(tǒng)

　　溶出度系統(tǒng)

　　光纖附件(目前世界上測(cè)試范圍最寬——可測(cè)到紫外區(qū)、反射效率最高的光纖!)

　　液體采樣附件

　　固體采樣附件

　　9、基本軟件功能強(qiáng)大、另有多種軟件可選：

　　UV WinLab 軟件：基于操作控制基礎(chǔ)上的軟件，主要可提供記錄、處理及儲(chǔ)存光譜數(shù)據(jù)，定量分析, 并進(jìn)行儀器校驗(yàn)，儀器的控制及附件的控制等。還包括KinLab(酶動(dòng)力學(xué))軟件及多達(dá)50種的生化(Bio)分析方法。

　　技術(shù)參數(shù)

　　1實(shí)驗(yàn)材料

　　儀器：Lambda25型紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)[珀金埃爾默儀器(上海)有限公司];KS-600D超聲清洗器(寧波科生儀器廠(chǎng));AG285電子分析天平(德國(guó)梅特勒公司)。

　　試劑：XDA-5大孔吸附樹(shù)脂(西安藍(lán)曉科技有限公司);氯化兩面針堿(中國(guó)藥品生物制品檢定所,供含量測(cè)定用,批號(hào)848-9901)。所用試劑均為分析純。

　　藥物：兩面針?biāo)幉娘嬈謩e購(gòu)自桂林、南寧、玉林各產(chǎn)地。

　　2方法與結(jié)果

　　2.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

　　取氯化兩面針堿對(duì)照品,加95%乙醇溶解制成7μg/mL的

　　溶液,置1cm吸收池中,以95%乙醇液為空白,在250～500nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。另取兩面針?biāo)幉奶崛∫?照“2.3”項(xiàng)方法處理,稀釋至一定濃度,置1cm吸收池中,在250～500nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,對(duì)照品及兩面針提取液在329nm處均有最大吸收,并且在328～331nm處峰型較平坦,有利于測(cè)定,故選擇329nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。見(jiàn)圖1。

　　2.2線(xiàn)形關(guān)系考察

　　分別精密移取氯化兩面針堿標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1mg/mL)0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2.0mL,用乙醇定容至25mL容量瓶中。按“2.1”項(xiàng)方法操作,于329nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度,以濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),得回歸方程：Y=97.75X-0.0255,r=0.9991(n=6)。結(jié)果表明,樣品液在3～8μg/mL之間呈線(xiàn)性關(guān)系。

　　2.3供試品的制備

　　2.3.1提取方法

　　精密稱(chēng)取兩面針?biāo)幉姆勰?.1g(過(guò)100目篩),置錐形瓶中,加25mL60%乙醇,超聲30min(工作頻率25～40MHz),抽濾,重復(fù)1次,合并濾液,減壓回收乙醇,加pH為3的酸水溶解,過(guò)濾,酸濾液再用等體積乙酸乙脂萃取2次,除去香豆素、木脂素等脂溶性雜質(zhì)。

　　2.3.2大孔吸附樹(shù)脂純化工藝

　　2.3.2.1大孔樹(shù)脂預(yù)處理

　　精密稱(chēng)取XDA-5型大孔樹(shù)脂2g,95%乙醇濕法裝玻璃層析柱(1cm×50cm),繼續(xù)用95%乙醇在柱上淋洗,不時(shí)檢查流出的乙醇,至與水混合(1∶5)不呈白色渾濁為止。最后用蒸餾水洗去層析柱中的乙醇,備用。

　　2.3.2.2吸附洗脫分離工藝

　　將提取液上柱,流速控制20mL/h。泄漏液無(wú)生物堿陽(yáng)性反應(yīng),說(shuō)明總生物堿已全部吸附。將已吸附好樣品的XDA-5樹(shù)脂先用50mL水洗脫除去無(wú)機(jī)鹽、蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì),再用50mL95%乙醇洗脫,流速控制20mL/h,接取95%乙醇的洗脫液,最終定容至50mL,即得供試品溶液。

　　2.4精密度考察

　　在同一樣品液中分別精密移取5份,于329nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度,計(jì)算含量。分別為6.24%、6.12%、6.23%、5.98%、6.00%,RSD=2.01%(n=5)。

　　2.5重復(fù)性考察

　　精密稱(chēng)取兩面針?biāo)幉募?xì)粉,按“2.3”項(xiàng)方法提取,于329nm處測(cè)定吸收度,計(jì)算含量。結(jié)果分別為6.25%、6.22%、6.23%、6.24%、6.26%,RSD=2.20%(n=5)。結(jié)果表明重復(fù)性較好。

　　2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　取供試品溶液,在0、1、2、4、8、12、18、24h分別測(cè)定吸收度,結(jié)果顯示在24h內(nèi)基本穩(wěn)定,RSD=2.14%(n=8)。

　　2.7加樣回收率試驗(yàn)

　　分別精密稱(chēng)取5份已知含量的兩面針?biāo)幉募?xì)粉0.05g,每份精密加入相當(dāng)于氯化兩面針堿3.0mg的對(duì)照品溶液,按“2.3”項(xiàng)方法提取,于329nm處測(cè)定吸收度,計(jì)算?；厥章史謩e為101%、99.5%、102%、96%、98.8%,平均為99.5%,RSD=2.32%(n=5)。

　　2.8樣品測(cè)定

　　按照以上方法測(cè)定3種不同產(chǎn)地兩面針?biāo)幉闹锌偵飰A的含量,每種產(chǎn)地的藥材分別平行測(cè)定5批。結(jié)果見(jiàn)表1。表1不同產(chǎn)地兩面針?biāo)幉募?xì)粉中總生物堿的含量測(cè)定結(jié)果(略)

　　3討論

　　總生物堿的含量測(cè)定一般都采用酸性染料比色法[2-4]或根據(jù)單體堿的母核相同直接測(cè)定[5],本試驗(yàn)曾試過(guò)用溴甲酚綠和溴麝香草酚藍(lán)顯色,用比色法在422nm處測(cè)定吸收度,但結(jié)果極其不穩(wěn)定,因此,酸性染料比色法不適用于測(cè)定兩面針中總生物堿的含量。

　　兩面針中主要含生物堿,且主要為苯并菲啶類(lèi)生物堿[1]。已報(bào)道的7個(gè)單體堿在(329±2)nm波長(zhǎng)處均有共同吸收[1]。并且樣品液用“2.3”項(xiàng)的方法處理后,可有效的排除其它成分的干擾,與測(cè)定結(jié)果一致。

　　在大孔樹(shù)脂純化總生物堿的工藝中,曾采用XDA-5、HPD-100和LSD-5B等8種大孔樹(shù)脂對(duì)兩面針中總生物堿進(jìn)行吸附和解吸附考察,其中XDA-5的動(dòng)態(tài)吸附分離效果最好,適合于兩面針中總生物堿的提純。

　　由于3種不同產(chǎn)地兩面針?biāo)幉闹锌偵飰A的含量相差較大,經(jīng)仔細(xì)觀(guān)察,從桂林購(gòu)買(mǎi)的取藥部位是根,而購(gòu)于南寧、玉林兩地的取藥部位是莖。因此,藥材部位不同總生物堿的含量相差較大,根部比莖部的總生物堿含量明顯偏高。故《中華人民共和國(guó)藥典》中測(cè)兩面針中生物堿含量取藥部位是根是有道理的[6]。

　　采用酸水冷浸、60%乙醇回流提取、60%乙醇超聲提取3種方法測(cè)得的同一批次的兩面針?biāo)幉姆勰┑暮科骄捣謩e是2.65%、1.65%、6.01%;因此,超聲提取方法優(yōu)于其它兩種,并且延長(zhǎng)超聲時(shí)間含量不再增加,表明提取完全。

　　兩面針[Zanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.]為蕓香科花椒屬植物,在我國(guó)主要分布于福建、廣東、廣西、云南等地,是民間常用的一種植物藥。其根、根皮及莖皮入藥,具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛等作用。主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、牙病、胃痛、咽喉腫痛、毒蛇咬傷等癥。兩面針中主要含生物堿,且主要為苯并菲啶類(lèi)生物堿[1]。目前文獻(xiàn)尚未有對(duì)其總生物堿進(jìn)行含量測(cè)定的報(bào)道。本試驗(yàn)建立了以紫外分光光度法測(cè)定兩面針中生物堿類(lèi)化合物含量的方法。